Le saint patron de Città di Castello est saint Florido, fêté le 13 novembre : selon la tradition, la ville fut détruite au VIe siècle par l'ostrogoth Totila puis reconstruite par l'évêque Florido, ensuite canonisé et proclamé patron de la ville. Le premier évêque documenté de la ville, alors appelée Tifernum Tiberinum, fut toutefois Eubodius, attesté en l'an 465.
La cathédrale des Saints Florido et Amanzio, principal édifice religieux de la ville, se reconnaît à son clocher rond caractéristique d'origine ravennate ; riche en œuvres d'art, elle conserve dans sa crypte le tombeau du saint patron. Le sanctuaire de la Madonna delle Grazie, construit au XIVe siècle comme église des Servites, devint lieu de vénération pour une image de la Madone à l'Enfant réalisée en 1456 par Giovanni da Piamonte, représentant la Vierge entre les saints Florido et Philippe Benizi. À l'époque romaine, le patron le plus illustre de la ville fut Gaius Plinius Caecilius Secundus, dit Pline le Jeune, qui, selon une de ses lettres, fit ériger un temple municipal, achevé en 103 ou 104 apr. J.-C., dont l'emplacement exact reste aujourd'hui inconnu.
